M1336 Агар для определения чувствительности к антимикотикам
|
Antimycotic Sensitivity Test Agar (Агар для определения чувствительности к антимикотикам) |
M1336 |
Рекомендуется для определения чувствительности к антимикотикам диск-диффузионным методом.
Состав:
|
Ингредиенты |
грамм/литр |
|
Казеина гидролизат ферментативный |
19,00 |
|
Дрожжевой экстракт |
10,00 |
|
Глюкоза |
20,00 |
|
Натрия цитрат |
10,00 |
|
Натрий фосфорнокислый двузамещенный |
1,00 |
|
Агар |
25,00 |
|
ph готовой среды (при 25°С) 6,6 ± 0,2 |
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Приготовление:
Размешать 85, 00 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов среды. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 минут. Хорошо перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.
МЕТОДИКА
1. Приготовление чашек со средой.
Налить 15 мл готовой среды в 90 мм чашку (толщина слоя агара около 2,4 мм) или 5 мл в чашку диаметром 50 мм. Подсушить чашки со средой 15 минут при 37 °С.
2. Приготовление инокулята:
Снять хорошо изолированные колонии 24-часовой культуры на среде Декстрозный агар Сабуро (Sabouraud Dextrose Agar M063) и суспендировать в стерильном 0,85% растворе NaCl, доводя мутность суспензии до 0,5 единиц МакФарланда.
3. Инокуляция:
Внести на подсушенные чашки приготовленный инокулят: 5 мл – в 90 мм чашку; 2 мл – в 50 мм чашку. Отсосать пипеткой излишнюю жидкость и оставить чашки при комнатной температуре на 15 минут. После этого, используя пинцет, положить диски с антифунгальными препаратами.
4. Инкубация:
Оставить чашки с дисками при комнатной температуре на 30 минут (для предварительной диффузии) и затем инкубировать при 37 °С 24-48 часов.
Контроль качества:
| Препарат (мкг/диск) | Рост культуры | Размеры зон задержки роста (мм) | |
| Candida albicans (ATCC 90028) |
Candida parapsilosis (ATCC 22019) |
||
| Амфотерицин В (50мкг) | обильный | 12-15 | 13-17 |
| Нистатин (50мкг) | обильный | 19-23 | 19-23 |
| Миконазол (50 мкг) | обильный | 26-32 | 23-29 |
| Миконазол (30 мкг) | обильный | 22-26 | 13-17 |
| Кетоконазол (50мкг) | обильный | 37-45 | 36-44 |
| Кетоконазол (30мкг) | обильный | 32-36 | 26-32 |
| Интраконазол (30мкг) | обильный | 18-22 | 20-24 |
| Флуконазол (25мкг) | обильный | 30-37 | 27-33 |
Интерпретация результатов
| Препарат | Символ | Нагрузка на диск | Диаметр зоны задержки роста |
Интерпретация | |
| Полиены | Амфотерицин В Нистатин AMB |
NYS | 100µg 100µg |
>10 <10 |
чувствительна устойчива |
| Азолы | Миконазол Кетоконазол |
MIC KET | 50µg 50µg |
>20 20-10 <10 |
чувствительна умеренно-устойчива устойчива |
| Интраконазол | ITR | 30µg | >10 <10 |
чувствительна устойчива |
|
| Флуконазол* | FLU | 25µg | >19 18-13 <10 |
чувствительна умеренно-устойчива устойчива |
*Согласно NCCLS используют нагрузку флуконазола только 25 мкг на диск и инкубируют только при температуре 35°C.
|
Референс-штаммы для контроля, рекомендуемые NCCLS |
|
Candida albicans ATCC 90028 |
|
Candida glabrata ATCC 90030 |
|
Candida parapsllosis ATCC 22019 |
|
Candida krusei ATCC 6258 |
Условия и сроки хранения:
Порошок хранить при температуре ниже +30°С. Использовать до даты, указанной на этикетке.